昆虫杆状病毒表达系统(Baculovirus Expression Vector System-BEVS) 广泛应用于科研和工业生产领域。与其他常用的重组蛋白表达系统相比,昆虫杆状病毒表达系统具有外源基因表达水平高、易于表达异源多聚体蛋白、安全性等优势,表达的重组蛋白通常具有正确的翻译后修饰和生物学活性,如二硫键的形成、磷酸化、糖基化等等。同时昆虫细胞悬浮生长,容易放大培养,有利于大规模表达重组蛋白。
国内独家提供自产的第二代昆虫杆状病毒表达系统产品ibac,杆状病毒DNA(Super ibac DNA),转移载体(pIAT),对照转移载体(pIAT GFP)和Super ibac DNA Kit(all-in-one kit),价格更优惠,供货更迅速! 我们还可以提供快速、高效、经济的昆虫杆状病毒表达系统重组蛋白服务。我们自主研发生产的杆状病毒表达试剂盒可以提供更高的重组蛋白表达水平,经验丰富的技术人员能够为您推荐最适合的服务,迅速解决在表达纯化过程中遇到的问题。
技术原理:
iBac系统是一个全新的生产重组杆状病毒的技术平台,免去了从亲代病毒中筛选重组病毒的步骤,不需要进行空斑实验,一步法杆状病毒蛋白表达系统,是目前最领先的杆状病毒表达系统。
通过对杆状病毒DNA的复制必需基因进行修改,使其不能在昆虫细胞中正常复制,只有和对应的转移载体同源重组,修复其复制必需基因,才能在昆虫细胞中进行复制,只有当Super ibac DNA和携带目的基因的转移载体pIAT成功同源重组后,才能在昆虫细胞中复制存活,因此共转染昆虫细胞后无需任何筛选,重组率为100%,一步法转染,简单快速,尤其经过基因改造后,重组蛋白更稳定,蛋白生物活性更高,适合分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白等难表达的蛋白。
ibac昆虫杆状病毒表达系统技术特点:
1.重组蛋白表达水平高(最高可达细胞总蛋白的50%),大多数为有生物功能的可溶性蛋白;
2.真核表达系统,重组蛋白生物学活性高,能同时表达多个外源基因;
3.可进行翻译后修饰:磷酸化修饰, 形成正确折叠的二硫键, 进行N-和O-型糖基化修饰
4.表达人源化蛋白,昆虫细胞中糖基化途径克服人源糖蛋白的问题。
5.大多数昆虫细胞系在不加血清培养基中快速生长,得到高滴度病毒和高产量重组蛋白;
6.相对于其他真核表达系统成本较低,硬件设施成本低接近于原核表达,无需CO2培养箱,无需血清培养基;
7.规模化培养简单经济,适合自动化生产,昆虫细胞比哺乳动物细胞操作简单;
8.商业化的BEVS系统让病毒重组及蛋白表达变得更简单;
杆状病毒表达系统介绍(BEVS)
第一代表达系统: Bac-to-Bac | 1.需要先在大肠杆菌系统中生产重组病毒, 筛选纯化后再转染昆虫细胞; 2.重组效率非常低,大量筛选工作。 |
第一代表达系统: BacPAK6/BaculoGold | 1.将杆状病毒DNA线性化, 引入多个Bsu361限制性酶切位点; 2.Bsu361不能100%切割病毒DNA使之线性化, 重组病毒仍需要进行空斑筛选。 |
第一代表达系统: BaculoDirect | 1.杆状病毒DNA线性化; 2.需要利用更昔洛韦(核苷类似物)筛选重组病毒,对细胞有毒性; 3.重组效率低,需要好几轮的扩繁。 |
第二代表达系统: iBac(Genenode) | 1.高效重组:重组率100%,经基因改造,仅重组病毒才能成活,无需加抗生素和任何筛选工作; 2.蛋白质量高:经基因改造,提高分泌蛋白效率,重组蛋白更稳定,蛋白生物活性更高; 3.适用于难表达的蛋白:分泌蛋白,膜蛋白,毒性蛋白; |
转染GFP基因:
pIAT GFP和super iBac DNA共转染 sf9 细胞 |
共转染昆虫细胞生产重组杆状病毒实验操作流程:
1. 接种细胞:将生长对数期的sf9细胞计数, 将1 x 106 Sf9 细胞铺均匀种于35mm平皿中,静置至少1小时;
下一步操作之前观察细胞确保细胞达到近汇合细胞单层。
2. 准备共转染质粒:取0.1mL无血清无抗生素细胞培养基到1.5mL EP管中,加入100ng super iBac DNA (5uL)和500ng 转移质粒pIAT(5uL),轻轻混匀。加入适量转染试剂,如5uL Lipofectin,混匀,室温静置20分钟,以形成脂质体-DNA混合物。
3. 移去培养皿中1mL培养基,若细胞培养基中有血清,则用1mL无血清培养基洗涤细胞两遍,最后加入1mL无血清培养基,注意,培养皿中留取1mL的培养基。
4. 立即将混匀的0.1mL DNA+脂质体混合液,轻轻加入到细胞培养皿中间,28℃培养箱温育5-24小时。
5. 取出培养皿加入1mL新鲜细胞培养基(可以是10%血清培养基,也可根据需要加入抗生素),继续28℃培养箱培养至5天。
6. 离心,收获平皿中的培养液上清,放入无菌管中,4度避光保存,作为重组病毒种子。
杆状病毒宿主细胞:
细胞系 | 来源 | 应用 | 培养基 |
Sf-9 | Spodopterafrugiperda Sf-9 (Pupal ovarian tissue) | 重组杆状病毒生产 胞内蛋白表达 空斑分析 | Sf-900II/III SFM HyQ SFX |
Sf-21 | Spodopterafrugiperda Sf-21 (Pupal ovarian tissue) | 胞内蛋白表达 重组分泌蛋白 | Sf-900II/III SFM ESF-921 HyQ SFX |
Hi-5 | Trichoplusiani Hi-5 (Ovarian cells) | 重组分泌蛋白 | EX-CELL 405 Express Five SFM HyQ SFX |
Tri-Ex | Sf-9 derivative | 胞内蛋白表达 | TriEX |
杆状病毒DNA的选择:
杆状病毒DNA | 特点 |
Super ibac S DNA | 删除了影响蛋白分泌的基因chiA和 v-cath, 提高polh转录提高蛋白产量及胞内蛋白稳定性;降低蛋白降解;利于蛋白分泌和膜蛋白定位 |
Super ibac P DNA | 转染极晚期时细胞裂解,提高假病毒粒子的产量,也适合胞质蛋白的表达 |
产品线:
货号 | 产品名称 | 产品规格 | 目录价 | 优惠价 | 备注 |
200818 | Super ibac S DNA | 5rnx | 7357.5 | 5886 | 杆状病毒DNA |
202818 | Super ibac S DNA Kit | 5rnx | 8982.5 | 7186 | 试剂盒(all-in-one kit) |
201801 | pIAT1 | 3μg | 812.5 | 650 | 转移载体 |
201802 | pIAT2 | 3μg | 812.5 | 650 | pIAT2转移载体 |
201803 | pIATGFP | 25μl | 812.5 | 650 | pIATGFP对照转移载体 |
200816 | Super ibac P DNA | 5rnx | 6570 | 5256 | 杆状病毒DNA |
202816 | Super ibac P DNA Kit | 5rnx | 8195 | 6556 | 试剂盒(all-in-one kit) |